凯氏定氮仪测氮方法
在研究凯氏定氮仪测氮方法之前,我们了解下凯氏定氮仪:适用于食品、饮料、医药、农林渔业、矿山、化工等生产企业,以及高等院校、科研院所、环境监测、土肥站、农机站、质量监督检验等科研检测单位对食品、乳制品、天然橡胶、乳胶、种子、土壤、植株、饲料、矿石、污泥及化学沉淀物等样品中对氮(蛋白质)含量的智能化测定。
我们来看下氮与蛋白质之间的关系,
氮与蛋白质的关系是怎么样的呢?蛋白质转换系数:
(1)一切蛋白质都含N元素,且各种蛋白质的含氮量很接近,平均为16%;
(2)蛋白质系数:任何生物样品中每1g元N的存在,就表示大约有1/16%=6.25g蛋白质的存在, 6.25常称为蛋白质常数
| 种类 | 蛋白质转换系数 |
乳制品 | 6.38 | |
面粉 | 5.70 | |
高粱 | 6.24 | |
| 花生 | 5.46 |
| 大豆及其制品 | 5.71 |
| 肉与肉制品 | 6.25 |
| 大麦、小米 | 5.83 |
| 芝麻、向日葵 | 5.30 |
了解好氮与蛋白质的转化关系后,我们来讨论下凯氏定氮仪测氮的方法
凯氏定氮仪测量样品中氮(蛋白质)含量主要经过三个步骤;
第一步:消解 目的是将有机物中的胺根在高温和催化剂CuSO4,浓H2SO4 作用下反应,生成(NH4)2SO4
反应方程式:
2NH2-+H2SO4+2H+=(NH4)2SO4
第二步 蒸馏 目的是将消解完成的样品在凯氏定氮仪中与碱发生反应,通过蒸馏释放出NH3 ;
反应方程式:
(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4
反应完成后,用H3BO3 溶液收集蒸馏释放出NH3,
反应方程式:
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
第三步 滴定 目的是将收集的NH3通过已知含量的标准酸滴定,反算出NH3的含量;
反应方程式:
(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
单位注解:
N:样品中蛋白质的百分含量;
V:样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;
V空白:试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积,ml;
C:硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度
M:称量样品的重量,g;
氮含量计算公式:
根据这三大步骤,就基本了解了凯氏定氮仪测氮的方法,凯氏定氮法要注意有以下几点
1、 不同的样品测试氮含量,由于样品特性不一样,消解的温度段设置是不一样的,对消解仪的加热温度均匀性和控温要求特别高,如果有挂壁等现象,对试验数据是用影响的,推荐参考消解仪方案书。
2、 其次是对凯氏定氮仪回收率的要求,如何保证回收率,同样是考核试验数据准确性的一个指标。影响回收率的主要因素有,蒸馏时间、加碱、硼酸是否过量,再次提到消解是否完全,仪器的密封性。冷却水水流、水压、水温是否过高(正常水温不要操作37度,否则氨气会逃逸)。推荐参考凯氏定氮仪技术方案书,了解如何保证凯氏定氮仪回收率。