动物鱼类蛋白质的测定方法
作者：祎鸿仪器 点击率： 发布时间：2017-11-20 17:48:00
鱼粉是一种重要的蛋白质原料，其安全性问题不能忽略。安全性主要体现在是否有药物和有毒物质残留，具体检测的指标包括新鲜度、药物残留、卫生指标等。鱼粉的新鲜度差，会严重降低鱼粉的品质，甚至丧失饲用价值。笔者着重讨论可标识鱼粉新鲜度的挥发性盐基氮（ＶＢＮ）含量的检测。
ＶＢＮ是指动物性食物由于酶和细菌的作用，
在腐败过程中，蛋白质分解而产生氨以及含氮胺类物质。此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后，用标准酸液滴定从而计算含量。本试验根据此原理，在半微量检测方法的基础上改良，使检测更简易、快捷。
１试剂
１．１１％氧化镁混悬液
分析纯氧化镁１．０ｇ溶于１００ｍＬ蒸馏水中，振摇成混悬液。
１．２２％硼酸吸收液
分析纯硼酸２ｇ溶于１００ｍＬ蒸馏水。
１．３０．１ｍｏｌ／Ｌ盐酸标准液
吸取分析纯盐酸８．３ｍＬ，用蒸馏水定容至
１０００ｍＬ，用无水碳酸钠标定。１．４０．０１ｍｌ／Ｌ盐酸标准液
用０．１ｍｏｌ／Ｌ盐酸标准溶液稀释。
１．５混合指示剂
甲基红０．１％乙醇溶液，溴甲酚绿０．５％乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存３个月以内。
２仪器
２．１全自动凯氏定氮仪２．２磁力搅拌器２．３离心机２．４消化管
２．５滴定管最小分度０．０１ｍＬ３分析步骤３．１样品处理
称取１０ｇ鱼粉（精确至±０．０００１）于２５０ｍＬ锥形瓶中，加１００ｍＬ（Ｖ总）蒸馏水，于磁力搅拌器上搅拌３０ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ。
３．２蒸馏滴定
吸取２０．０ｍＬ２％硼酸吸收液于锥形瓶中，加混合指示剂２￣３滴，使ＫＤＮ－２Ｃ型定氮仪的冷凝管末端浸入此溶液。准确吸取１０．０ｍＬ（Ｖ分）上述样品清液于消化管中，加少量蒸馏水冲洗，再加入１０ｍＬ１％的氧化镁溶液，蒸馏至１５０ｍＬ（约
５ｍｉｎ）。吸收液立即用０．０１ｍｏｌ／Ｌ盐酸标准溶液滴
定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时做试剂空白。
４计算
挥发性盐基氮（Ｗ）以每１００ｇ样品含氮ｍｇ数表示。
Ｗ（ｍｇ／１００ｇ）＝Ｃ×（Ｖ１－Ｖ２）×１４ｍ×
（Ｖ分取／Ｖ总）×１００
Ｗ－样品中挥发性盐基氮的含量，ｍｇ／１００ｇ；Ｖ１－测定试样所消耗盐酸标准溶液体积，ｍＬ；Ｖ２－试剂空白消耗盐酸标准溶液体积，ｍＬ；Ｃ－盐酸标准溶液的实际浓度，ｍｏｌ／Ｌ；
１４－与１．００ｍＬ标准标准滴定溶液［ｃ（ＨＣｌ）＝１．０００ｍｏｌ／Ｌ］相当的氮的质量，ｍｇ；
检测分析
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓ
ｍ－样品质量，ｇ。
结果的表述：取两次结果的平均值，保留３位有效数字。
温度对ＶＢＮ含量的影响
磁力搅拌过程也要维持一定的温度，温度越高，ＶＢＮ含量越大，检验的误差越大（表２）。
５允许差
相对误差≤１０％。
温度ＶＢＮ（ｍｇ／１００ｇ）
１０５１０８１２２１５４
２０℃２５℃３０℃３２℃
６影响因素
６．１时间
ＶＢＮ的检测反映的是鱼粉腐败过程所产生的
氨以及胺类等碱性含氮物质，因此，离心后的样液应马上检测。笔者以粗蛋白质含量为６５％的进口秘鲁鱼粉为例，对比时间对ＶＢＮ含量的影响（表１）。
时间
以上表明，磁力搅拌中控制温度在２０￣２５℃最佳。
７其他
７．１鱼粉执行质量标准（鱼粉ＧＢＴ１９１６４－２００３）
主要技术参数
项目粗蛋白质／％
时间对ＶＢＮ含量的影响
ＶＢＮ（ｍｇ／１００ｇ）
１７５１５８１３３１１２１０６１０５
鱼粉ＧＢＴ１９１６４－２００３
指标
特级品一级品二级品三级品
２ｈ１ｈ０．５ｈ１０ｍｉｎ５ｍｉｎ３ｍｉｎ
≥６５≥６０≥５５≥５０≤１５０
挥发性盐基氮ＶＢＮ（ｍｇ／１００ｇ）≤１１０≤１３０≤１５０
７．２本检测方法可推广应用至其他的动物性蛋
以上表明，试液应在５ｍｉｎ以内进行测定。
白质饲料，例如血浆蛋白粉、血球蛋白粉，等等。
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